Контроль количества жизнеспособных клеток в препарате Энтоцид

Контроль кількості життєздатних клітин в препараті Ентоцид

Возникает частый вопрос у покупателей, как проверяется наличие жизнеспособных спор заявленных грибов в препарате Энтоцид у вас на предприятии, и как это можно приближённо проверить в домашней лаборатории?

Для проверки титра энтомопатогенных грибов в препарате Энтоцид согласно ТУ У 20.2-32813696-031:2015 используют посев на питательную среду Сабуро

Подготовка среды Сабуро проводят следующим образом.

На 1 л питательной среды вносят:

  • 10 г – Пептона;
  • 20г – микробиологического агара;

Раствор нагревают на водяной бане до полного растворения агара, после растворения агара в раствор вносят 40 г – глюкозы.
После среду охлаждают до 50С и доводят рН 5,7 – 5,9. Среду стерилизуют в автоклаве – режим 30 мин. 115 С (0,5 атм.);

Для ингибирования роста бактерий используют антибиотик – хлорамфеникол (торговая марка Левомицитин);

Посев проводят с использованием десятичных разведений, поэтому важно провести правильно пробо подготовку!

Подготовку десятичных разведений проводят следующим методом:

Навеску препарата 10г, помещают в колбу объемом 250 см3 с 90см3 стерильной питьевой или дистиллированной воды c твин-80, или физиологического раствора с добавлением 1-2 капель препарата Адюмакс (Добавление ПАВ обязательно!!! Чтобы смыть споры с носителя), тщательно перемешивают (разведение 101).

При исследовании сухого препарата растворенную навеску прокачать на лабораторной качалке с количеством оборотов 200 – 240 в минуту на протяжении 30-60 минут. Суспензию объемом 1,0 см3 вносят в пробирку с 9,0 см3 стерильного физ. раствора, тщательно перемешивают с помощью новой стерильной пипетки, вбирая в пипетку и выпуская из нее полученную суспензию. Процедуру повторяют 4-6 раз для равномерного распределения спор во всем объеме растворителя (разведение 102). Затем этой же пипеткой набирают 1,0 см3 суспензии и переносят ее во вторую пробирку с 9,0 см3 стерильного физ. раствора – это третье разведение (103). Делают ряд разведений, до 10-8

Высевают по 0,1-0,5 см3 из трех последних разведений (т.е. 106, 107 и 108) (по три чашки на каждое разведение, начиная от большего или используя каждый раз стерильную новую пипетку для одного разведения), поверхностно. Тщательно распределяют биоматериал шпателем Дригальского по поверхности агаровой пластины.

Засеянные чашки инкубируют при температуре (25±1) С в течение 5 – 7 суток, после чего учитывают выросшие колонии.

При этом получаем следующий результат

Зростання грибів продуцентів препарату Ентоцид 10 в 7 розведення

107 розведение

 

Зростання грибів продуцентів препарату Ентоцид 10 в 8 розведення

108  розведение

 

 

Translate »