Контроль кількості життєздатних клітин в препараті Ентоцид

Виникає найчастіше питання у покупців, як перевіряється наявність життєздатних спор заявлених грибів в препараті Ентоцид у вас на підприємстві, і як це можна приблизно перевірити в домашній лабораторії?

Для перевірки титру ентомопатогенних грибів в препараті Ентоцид згідно ТУ У 20.2-32813696-031 діє до: 2015 використовують посів на живильне середовище Сабуро.

Підготовку середовища Сабуро проводять наступним чином.

На 1 л живильного середовища вносять:

• 10 г – пептони;
• 20г – мікробіологічного агару;

Розчин нагрівають на водяній бані до повного розчинення агару, після розчинення агару в розчин вносять 40 г – глюкози. Після цього середовище охолоджують до 50С і доводять рН 5,7 – 5,9. Середовище стерилізують в автоклаві – режим 30 хв. 115 С (0,5 атм.).
Для пригнічення росту бактерій використовують антибіотик – хлорамфенікол (торгова марка левоміцітін);

Посів проводять з використанням десяткових розведень, тому важливо провести правильно підготовку!

Підготовку десяткових розведень проводять наступним методом:
Навіску препарату 10г поміщають в колбу об’ємом 250 см³ з 90см³стерильною питною, або дистильованої води c твін-80, або фізіологічного розчину з додаванням 1-2 крапель препарату Адюмакс (Додавання ПАР обов’язково!!! Щоб змити суперечки з носія), ретельно перемішують ( розведення 10¹).

При дослідженні сухого препарату розчинену навіску прокачати на лабораторній гойдалці з кількістю оборотів 200 – 240 в хвилину, протягом 30-60 хвилин.

Суспензію об’ємом 1,0 см³ вносять в пробірку з 9,0 см³ стерильного фіз. розчину, ретельно перемішують за допомогою нової стерильної піпетки, вбираючи в піпетку і випускаючи з неї отриману суспензію. Процедуру повторюють 4-6 разів для рівномірного розподілу у всьому обсязі розчинника (розведення 10²). Потім цією ж піпеткою набирають 1,0 см³ суспензії і переносять її в другу пробірку з 9,0 см³ стерильного фіз. розчину – це третє розведення (10³). Роблять ряд розведень, до 10^-8

Висівають по 0,1-0,5 см³ з трьох останніх розведень (тобто 10⁶, 10⁷ и 10⁸), по три чашки на кожне розведення, починаючи від більшого або використовуючи кожен раз стерильну нову піпетку для одного розведення, поверхнево. Ретельно розподіляють біоматеріал шпателем Дрігальского по поверхні агарової пластини.

Засіяні чашки інкубують при температурі (25 ± 1) З протягом 5 – 7 діб, після чого враховують виросли колонії.

При цьому отримуємо наступний результат

10⁷ розведення

10⁸ розведення